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產品名稱:

柯薩奇病毒(CV)熒光探針法PCR檢測試劑盒

產品型號: 產品時間: 2023-03-08
柯薩奇病毒(CV)熒光探針法PCR檢測試劑盒適用于檢測的糞便或腹瀉物等標本中柯薩奇病毒 A6 型 RNA,適用于柯薩奇病毒 A6 型感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
本試劑盒用一對柯薩奇病毒 A6 型特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對柯薩奇病毒 A6 型 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

產品概述

柯薩奇病毒(CV)熒光探針法PCR檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

商品名稱:柯薩奇病毒 A6 型(CAV-6)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Coxsackievirus type A6 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規格】48 份/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測的糞便或腹瀉物等標本中柯薩奇病毒 A6 型 RNA,適用于柯薩奇病毒 A6 型感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對柯薩奇病毒 A6 型特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對柯薩奇病毒 A6 型 RNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

名 稱 規 格

酶液 50μl×1 管

CAV-6 反應液 1.0ml×1 管

CAV-6 陽性質控品 50μl ×1 管

陰性質控品 250μl ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,

有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

取糞便或腹瀉物置入無菌玻璃管中,用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標

本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區)

1.1樣本前處理

取黃豆顆粒大小糞便或 100uL 水樣腹物置于 1.5mL 離心管中,按 RNA 提取試劑

盒說明書進行提取。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取

法),請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性

對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑 CAV-6 反應液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣(樣本處理區)

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl,分別加入相應的反

應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環參數設置:

步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲

線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

6. 檢測方法的局限性

樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或

定量檢測不準確的結果;

本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

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