兔出血癥病毒通用型(RHDV)熒光PCR試劑盒?說明書
【產品名稱】
通用名稱:兔出血癥病毒通用型(RHDV)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)
Name :RABBIT HEMORRHAGIC VIRUS GENERAL TYPE (RHDV) NUCLEIC ACID AMPLIFICATION DETECTION Kit (PCR Fluorescent Probe Method)
【包裝規格】48T/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測全血等樣本中的兔出血癥病毒通用型(RHDV),用于兔出血癥病毒通用型(RHDV)感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對兔出血癥病毒通用型(RHDV)?特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光 PCR 技術對兔出血癥病毒通用型(RHDV)?的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
名 稱 規 格
核酸提取液 1.5ml×2 管
酶液 50μl×1 管
YP 反應液 1.0ml×1 管
YP 陽性質控品 50μl ×1 管
陰性質控品 250μl ×1 管
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件和有效期】
試劑盒保存于-20±5℃,有效期 12 個月;
避免反復凍融,凍融次數不超過 5 次;試劑開瓶后,在室溫條件下放置時間不
應超過 8 小時;運輸采用干冰(或者冰袋)保持低溫,運輸時間不應超過 4 天。試
劑盒生產日期見產品標簽。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本要求】
標本采集:用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管
保存運輸:上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過
6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
【使用方法】
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0121禽流感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核酸檢測試劑盒48T |
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0391禽流感病毒H5N6亞型(IAV-H5N6)核酸檢測試劑盒(R48T |
0331禽流感病毒H5N1亞型(IAV-H5N1)核酸檢測試劑盒(R48T |
0371甲型流感病毒H3N8亞型(IAV-H3N8)核酸檢測試劑盒(48T |
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1樣本前處理
取抗凝血下層血細胞 50uL,加入 100uL 雙蒸水吹勻
1.2DNA 提取
1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液(固體標本加入50uL核酸提取液),
100℃恒溫處理 10 分鐘,13,000 rpm 離心 5 分鐘,取上清液轉移至新的 1.5ml
EP 管,-20℃保存;
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的 DNA 提取試劑
盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制(試劑準備區)
根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 YP 反應液 酶液
用量(樣本數為 N) 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區)
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl,分別加入相應的反
應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴增(核酸擴增區)
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;
熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)
NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置:
步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結果分析判定
5.1結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出
現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍
內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上
下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數增長曲線;
可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
7. 質控標準
陰性質控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32;
以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
8. 產品性能指標
陰陽性參考品符合率:8 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合
率為 100%。
低檢測限:2.0×102copies/ml。
精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均≤3%。
公司優勢:
1)質量:我司提供的的試劑為世界
2)價格:價格實惠,量大從優。
4)服務:提供完整的售前、售后和售中服務。售后到底
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